【科普】了解细胞制备全过程

国家或行业颁布的细胞治疗相关指导原则和管理办法中要求，造血干细胞等储存类产品的制备操作应在十万级背景下的百级环境或更高，细胞培养技术服务产品的制备操作应在万级背景下的百级环境或更高。

洁净室等级标准

洁净室需要将一定范围内空气中的微粒子、有害空气、细菌等之污染物排除，并将无尘室内温度、洁净度、室内压力、气流速度与气流分布、噪音振动及照明、静电控制在某一需求范围内，通常根据实验室空气中的颗粒数量，对洁净室进行分类。

洁净室的分类根据国家不同有不同的等级规定，目前世界各国虽有自订规格，但普遍还是采用美国联邦标准【Federal Standard (FS) 209E, 1992】。

其中需要注意的，A、B、C、D级别的划分是参照ISO标准（欧盟采纳的方式），其本身包含了静态要求和动态要求。旧版GMP采纳的是美国的洁净间划分方式，旧版的洁净间划分仅有静态的概念，不要求动态。

在美国的联邦标准209（A至D）中，在一立方英尺的空气中测量等于或大于0.5mm的颗粒数，并且该计数用于对洁净室进行分类。该标准的最新209E版本也接受该度量标准。联邦标准209E在国内使用。较新的标准是国际标准组织的TC 209。

这两个标准都根据实验室空气中的颗粒数量对洁净室进行了分类。洁净室分类标准FS 209E和ISO 14644-1要求进行特定的颗粒计数测量和计算，以对洁净室或洁净区域的清洁度水平进行分类。

生物洁净室洁净度等级

（洁净度等级表）

洁净室按空气清洁程度分类，如果无尘室的等级只用尘粒数目来叙述，则可假设尘粒的尺寸为0.5μm，例如，1级、10级、100级无尘室最大尘埃粒子数目分别小于或等于1颗、10颗、100颗。如果尘粒尺寸不是0.5μm，无尘室等级应以在一特定尘粒尺寸的级数来表示，分别分为1级、10级、100级、1000级、10000级、100000级，数值越小，净化级别就越高，洁净度越高造价就越高。

各行业对洁净室的净化要求也有所不同：

1级：主要用于制造集成电路的微电子工业，对集成电路的精确要求为亚微米。

10级：主要用于带宽小于2微米的半导体工业。

100级：可用于医药工业的无菌制造工艺等。

1000级：主要用于高质量光学产品的生产，还用于测试，装配飞机蛇螺仪，装配高质微型轴承等。

10000级：主要用于液压设备或气压设备的装配，某些情况下也用于食品饮料工业，此外，万级洁净室在医工业中也很常用。

100000级：十万级洁净室用于很多的工业部门，比如光学产品的制造，用于较小的元器件制造大型的电子系统，液压或气压系统的制造，食品饮料的生产，医、药工业也常常使用。

国家组织工种子细胞库具有完善的质量管理体系，通过ISO质量管理体系认证。质控管理体系检测覆盖产品制备全流程，包含供体材料的获取、运输、接收、产品生产和检验到成品放行、储存和运输。今天以干细胞为例，聊一下我们的检测是如何贯穿整个细胞生产制备全流程的。免疫细胞制备是一个非常复杂和精密的过程，总体制备流程可以分为5步来说：

01.样本采集

样本采集前筛选依据不同细胞的特点，建立了合理的供者筛查程序和标准，来防范可能的病毒传染、遗传疾病及组织排异等风险。样本采集前，我们会对客户进行血常规及病毒筛查，检查结果合格后方可采集；

 02.样本采集后检测合格进生产区

实验室收发人员接收到血液或组织样本后，检测人员对外周血的血常规进行检查，并对血样进行病毒再次检测，样本检测合格后方可进入生产区制备。为了缩短窗口期对筛查的影响，我们在酶联免疫法的基础上增加了核酸检测法，进一步降低异体应用细胞的病毒传染风险；

03.制备过程中安全性，有效性检测

在细胞培养过程中，每天对培养中的细胞取样进行安全性和有效性检测，如进行细胞计数、活率知晓细胞倍增是否正常，进行无菌检查、支原体检测以及细胞流式表型分析。符合质量检测标准的方可用于细胞出库；

04.细胞制剂检测

细胞最终以细胞制剂方式进行出库，细胞制剂除了安全性和有效性检测外，我们也会进行外观、装量、PH、残留量等检测。符合标准的细胞制剂方可放行出库；

05.产品出库后细胞留样
细胞出库的同时会留取部分终产品细胞进行留样，用于产品质量回顾。